کیت الایزا | کیت ELISA | خرید کیت ELISA | خرید کیت الایزا | نمایندگی کیت الایزا

کیت الایزا : (‌ELISA) یک آزمایش بیوشیمیایی تحلیلی است که ابتدا توسط Weiland در سال 1978 توصیف شد.این آزمایش با استفاده از آنزیم فاز جامد برای تشخیص حضور لیگاند (معمولا یک پروتئین) در یک نمونه مایع با استفاده از آنتی بادی هایی که علیه پروتئین مورد نظر اندازه گیری می شوند، استفاده می شود.

جهت کسب اطلاعات بیشتر در مورد تست الایزا و کیت های تحقیقاتی الایزا، با شرکت سفیرآزما کیان، فعال در زمینه بیوتکنولوژی و کیت های تحقیقاتی، تماس بگیرید.

الایزا ELISA به عنوان یک ابزار تشخیصی در پزشکی و آسیب شناسی گیاه و به عنوان کنترل کیفیت در صنایع مختلف مورد استفاده قرار گرفته است.

در فرم ساده ی ELISA، آنتی ژن ها از نمونه به یک سطح متصل می شوند. سپس، یک آنتی بادی تطبیقی ​​بر روی سطح اعمال می شود تا بتواند به آنتی ژن متصل شود. این آنتی بادی به آنزیم مرتبط است و در مرحله نهایی یک ماده حاوی آنزیم اضافه می شود. واکنش بعدی یک سیگنال قابل تشخیص را تولید می کند، اغلب تغییر رنگ در بسترمیباشد.

ساز و کار الایزا

انجام الایزا ELISA شامل حداقل یک آنتی بادی با خاصیت آنتی ژن خاص است.

نمونه با مقدار ناشناخته آنتی ژن بر روی یک پروتئین جامد (معمولا پلیت استریل  میکروتتریک صفحه) یا غیر اختصاصی (از طریق جذب به سطح) یا به طور خاص (از طریق گرفتن یک آنتی بادی دیگر با خاصیت آنتی ژن مشابه در “ساندویچ” “ELISA”)میتواند باشد.

پس از آنکه آنتی ژن بی حرکت می شود، آنتی بادی تشخیص اضافه می شود، که یک مجموعه با آنتی ژن را تشکیل می دهد. آنتی بادی شناسایی می تواند به یک آنزیم مرتبط شود یا خود آن را با یک آنتی بادی ثانویه تشخیص دهد که از طریق آنزیم بوسیله bioconjugation شدن مرتبط است.

بین هر مرحله، بشقاب به طور معمول با یک محلول شوینده خفیف برای حذف هر پروتئین یا آنتی بادی که به طور غیر اختصاصی محدود می شوند، شسته می شود. پس از مرحله نهایی شستشو، با اضافه کردن یک سوسپانسیون آنزیمی برای تولید یک سیگنال قابل رویت توسعه داده می شود، که نشان دهنده مقدار آنتی ژن در نمونه میباشد.

الایزا می تواند به جای روش های دقیق “ایمنی”، فرم های دیگر آزمایش های اتصال لیگان را انجام دهد، هرچند این نام “ایمنی” اصلی را به علت استفاده مشترک و تاریخ توسعه این روش انجام می دهد. این تکنیک اساسا نیازمند هر واکنش لیتیوب است که می تواند روی فاز جامد همراه با یک واکنش تشخیصی که به طور خاص متصل می شود و از یک آنزیم برای تولید یک سیگنال استفاده می شود که می تواند به درستی اندازه گیری شود

در بین شستن، تنها لیگاند و همتایان خاص آن باقی می ماند به طور خاص متصل یا “immunosorbed” توسط تعاملات آنتی ژن آنتی بادی به فاز جامد باقی می ماند، در حالی که اجزای غير اختصاصی و یا عدم اتصال از بین می روند.

تست ELISA با روش‌هاي گوناگوني انجام مي‌شود كه كه به صورت كلي به دو دسته ELISA مستقيم و غير مستقيم تقسيم بندي مي‌شود.: الايزايي كه براي تشخيص حضور آنتي ژن ها مي تواند به كار رود كه بوسيله آنتي بادي شناسايي را انجام مي دهد يا آن مي تواند آزمايش كند آنتي بادي هايي كه آنتي ژن ها را شناسايي مي كنند در الايزاي عمومي 5 مرحله وجود دارد :

1- ديواره پليت ها با آنتي ژن ها كد شده است

2- مسدود كردن تمام نواحي باند نشده براي جلوگيري از جواب هاي مثبت منفي

3- اضافه كردن آنتي بادي اوليه (براي مثال آنتي بادي مونوكلونال خرگوشي ) به چاهك ها

4- اضافه كردن آنتي بادي ثانويه جفت شده با آنزيم (مثل anti IgG موشي ) به چاهك ها

5- واكنش سوبسترا با آنزيم و توليد رنگ بنابراين مشخص شدن واكنش هاي مثبت

مراحل انجام يك آزمون ELISA كه تقريبا در تمام انواع آن مشترك است عبارت است از:

1) پوشش دهي، كه به معني جذب يك آنتي‌ژن يا آنتي‌بادي با سطوح جامد است.

2) اضافه كردن نمونه‌هاي مورد آزمايش.

3) گذشت مدت زمان كافي براي انجام واكنش كه به اصطلاح انكوباسيون واكنشگرها ناميده مي شود.

4) انجام عمل شستشو توسط واشر ELISA ، به منظورجدا كردن واكنشگرهاي متصل شده و واكنش داده از واكنشگرهاي آزاد و متصل نشده ‌.

5) اضافه عوامل لينك شده با آنزيم.

6) مجددا طي مدت زمان انكوباسيون براي واكنشگرها ‌.

7)استفاده مجدد از واشر ELISA جهت انجام عمل شستشو ‌.

8) افزودن زيرلايه آنزيم جهت تشخيص واكنش دهنده‌ها.

 9) طي زمان انكوباسيون.

10) اتمام واكنش آنزيمي توسط متوقف كننده‌ها و خوانش دانسيته نوري به دست آمده توسط خواننده

 

 مراحل ELISA

• فاز جامد میکرو پلیت هایی هستند که به طور تجاری در دسترس می باشند 8*12 خانه دارند

• مرحله جذب سطحی : در این پروسه آنتی بادی یا آنتی ژن که بصورت محلول در یک بافر قرار دارد اضافه می شود سپس به طور تهاجمی به فاز جامد در حالت انکوبه حمله می کند در واقع عدم حرکت آنتی بادی یا آنتی ژن در فاز ثابت عامل اصلی موفقیت واکنش در ELISA است.

• مرحله شستشو : چاهک ها پر از محلول های بافری می شوند و خالی می شوند برای جدا شدن اتصالات و غیر اتصالات یا آنتی بادی ها یا آنتی ژن های آزاد در پلیت های الایزا ، این مرحله نقش مهمی را در واکنش ها بازی می کند.

• آنتی ژن ها : یک پروتئین یا کربوهیدرات است که وقتی به حیوانات تزریق می شود تولید آنتی بادی می کند بنابراین آنتی بادی ها به طور اختصاصی با آنتی ژن ها واکنش می دهند و می توان از آنها برای تشخیص آنتی ژن ها استفاده نمود

• آنتی بادی : تولیداتی که در پاسخ به آنتی ژن ها ایجاد می شوند از جنس پروتیئن هستند

• آنزیم : ماده ای که می تواند با یک غلظت پایین واکنش دهد مثل کاتالیز کردن واکنش های اختصاصی .چندین آنزیم اختصاصی به طور روتین در الایزا بکار می روند

• آنزیم های کانجوگیت : آنزیم هایی که به طور تغییر ناپذیری به واکنش های مخصوصی حمله می کنند این واکنش ها سیگنالهایی مثل تغییر رنگ که قابل خوانش است ایجاد می کنند ( به طور مستقیم مثل تغییر رنگ ماده یا غیر مستقیم بوسیله تاثیر روی یک ماده شیمیایی دیگر )

• توقف : پروسه توقف فعالیت آنزیم روی یک ماده .این مرحله تاثیر روی توقف تغییرات رنگی بعدی در ELISA دارد

• خوانش: اندازه گیری رنگ تولید شده در ELISA . این کمیت بوسیله خوانش اختصاصی در اسپکتوفتومتری در ولتاژ مخصوص برای رنگ های خاص بدست آمده با آنزیم های خاص انجام می شود این تست ها می تواند بوسیله چشم تشخیص داده شود.

چه نوع از روش های ELISA ممکن است به کار رود ؟

الایزای مستقیم: در این الایزا آنتی ژن ها به فاز جامد متصل شده اند و آنزیم ها به آنتی بادی لیبل شده اند این نوع از روش ها به طور کلی در اندازه گیری نمونه های سخت دشوار است، از آنجا که پروتئین های آلوده برای نواحی های اتصال پلاستیکی با هم رقابت دارند

الایزای غیر مستقیم : در این الایزا آنتی ژن ها به فاز جامد متصل شده اند اما در این مورد آنتی بادی اولیه لیبل ندارد وآنزیم کونجوگیتو بعنوان آنتی بادی ثانویه به طور مستقیم به آنتی بادی اولیه وصل می شوند این شکل اغلب به کار می رود. اين روش برای تعيين آنتی بادی اختصاصی و يا تيتراسيون آنتی بادی در نمونه های سرم مورد استفاده قرار می گيرد . اساس آزمايش بدين نحو است که معمولاً سرم رقيق شده به آنتی ژن های کوت شده در فاز جامد ( ميکروول يا چاهک ) اضافه می شود .

آنتی ژن کوت شده آنتی ژن اختصاصی مربوط به آنتی بادی است که قرار است در نمونه رد يابی شود ، پس از افزودن نمونه و طی زمان انکوباسيون و يک مرحله شستشو آنتی هيومن گلوبولين نشاندار شده با آنزيم به چاهک اضافه می شود بر حسب اينکه چه کلاسی از آنتی بادی برای رديابی اهميت دارد نوع آنتی هيومن مورد استفاده نيز متفاوت است مثلاً برای رديابی آنتی بادی کلاس IgG از آنتی هيومن IgG و برای رديابی کلاس IgA از آنتی هيومن IgA استفاده می شود . بهترين مثالها در مورد اين روش تعيين آنتی بادی بر عليه توکسوپلاسما ، روبلا ، ويروس سيتومگال و هليکوباکتر پيلوری از کلاس IgM ، IgA و IgG در سرم می باشد .

الایزای رقابتی : این سومین نوع الایزا از روش رقابتی استفاده می کند در این روش به طور همزمان آنتی بادی ها یا پروتئین ها رقابتی اضافه می شود . کاهش در سیگنال نمونه ها جایی که آنتی بادی یا پروتئین دوم نتایج اختصاصی بالایی می دهد روش هاي رقابتي نيز بر پايه رقابت دو آنتي ژن يا دو آنتي بادي براي اتصال ليگاند با مقدار محدود استوار است. اگر اضافه كردن هردو آناليت به سيستم همزمان انجام شود، روش را رقابتي مي نامند ولي چنانچه ابتدا آناليت اضافه شده و پس از يك دوره زماني انكوباسيون آناليت نشاندار اضافه گردد روش را مهاري مي نامند.

ساندویچ الایزا : آخرین نوع روشی است که به کار می رود اتصال آنتی بادی ها به فاز جامد حمایت می شود نمونه ها حاوی آنتی ژن های شناخته شده یا ناشناخته هستند سپس بافر یا ماتریکسی اضافه می شود که اتصالات را به فاز جامد به حداقل رسانده اند آنزیم های لیبل شده به آنتی بادی ها سپس برای تشخیص اضافه می شوند . روش ساندويچ كه متداول‌ترين روش ELISA است، يك آنتي ژن در بين دو آنتي بادي اختصاصي قرار مي گيرد.

 

ما چه خدماتی ارائه می دهیم؟

ایران مرک وارد کننده مستقیم مواد شیمایی و کیت های تحقیقاتی از معتبر ترین برند های دنیاست که سابقه سال ها همکاری با دانشجویان، اساتید دانشگاه، شرکت های تولیدی و آزمایشگاه ها دارد.

ما توانسته ایم با وجود تحریم های ناعادلانه علیه کشورمان، مواد شیمیایی اصل و با کیفیت شرکت هایی همچون مرک و سیگما آلدریچ را به دست مصرف کنندگان داخلی برسانیم تا بتوانیم نقشی در فراهم آوردن امکانات جهت پیشبرد تحقیق، تولید و توسعه داشته باشیم.

ایران مرک

مرکز فروش مواد شیمیایی آزمایشگاهی، فروش مواد آزمایشگاهی، فروش کیت تحقیقاتی و تجهیزات آزمایشگاهی از معتبر ترین برندهای دنیا از جمله سیگما آلدریچ، مرک آلمان، ترموفیشر، پرومگا و …

ایران مرک  : با تشکر از تیم تحقیقاتی پایان نامه من و طراحی سایت اراک

[wpseo_address show_state="1" show_country="1" show_phone="1" show_phone_2="1" show_fax="1" show_email="1" show_url="1" show_logo="1"]